輔酶Ⅰ系列試劑盒的樣本處理及要求:
1、組織勻漿:用預冷的PBS沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。
2、血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3、血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2-8°C1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
4、細胞培養物上清或其它生物標本:取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
輔酶Ⅰ系列試劑盒的注意事項:
1、應避免抗體在稀釋至工作濃度后在4℃下保存超過一天。蛋白質在高濃度下保存時一般不易降解,理想的濃度更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質例如BSA作為穩定劑的理論基礎。加入的蛋白質也有助于減少抗體因結合于容器壁上而造成的損失。對于打算進行偶聯的抗體而言,由于穩定蛋白質會與抗體競爭,降低了偶聯的效率,所以不應加入穩定蛋白質。
2、重復冷凍/融化循環可使抗體變性,導致其形成使抗體結合能力降低的聚集物。保存于-20℃對于大多數抗體是適當的;保存于-80℃無明顯優勢。冰箱不能為無霜型。這些冷凍和融化之間的循環(以減少結霜)恰恰是應該避免的。
3、抗體試劑瓶應置于具有較小溫度波動的冰箱區域,例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。有些研究人員加入冷凍保護劑甘油達到50%的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點降低至低于-20℃。雖然這對于很多抗體是可接受的,但是只有一小部分我們提供的抗體測試了在該保存條件下的穩定性,并且我們的保證僅使用于按數據表上推薦的方式保存的抗體。不建議將包含甘油的溶液保存于-80℃,因為該溫度低于甘油的凝固點。請注意甘油可被細菌污染,如果加入甘油或任何冷凍保護劑,則應當小心操作,以得到無菌制備物。